实验一  培养基的配制及灭菌

一、实验目的

通过该实验掌握组织培养中培养基的配制及灭菌方法，熟悉培养基配制及灭菌过程中的注意事项。

二、药品和仪器

1、药品：MS培养基配方所需药品、琼脂、蔗糖；

2、仪器：烧杯、三角瓶、电炉、高压灭菌锅、玻棒、漏斗、精密PH试纸

三、实验步骤

1、母液的配制（由老师提前准备）

2、培养基的配制：

（1）    取1000ml的烧杯一个，用蒸馏水冲洗2次，假如200ml蒸馏水，然后按培养基配方（MS+6-BA1.0+NAA0.2+3%蔗糖+0.8%琼脂；培养基体积为1L）逐一加入药品，然后用蒸馏水将总体加到1L。

（2）    对以上配制好的培养基加热，使蔗糖和琼脂溶解，并用试纸将PH调为5.8。

3、培养基的分装：趁热将上面溶解的培养基分装到三角瓶中，每个三角瓶注入20ml左右的培养基，并及时封口，已备灭菌使用。

4、培养基的灭菌：将以上装好的培养基放入高压灭菌锅内灭菌（在121℃下保持15mim）。

 

实验二  培养材料的消毒及接种

一、实验目的

通过该实验掌握培养材料的消毒方法及过程，学会培养材料的接种。

二、药品和仪器

1、药品：0.1%HgCl₂、酒精

2、仪器：烧杯、镊子、剪刀、培养皿、酒精灯、超净工作台。

三、实验步骤

1、取材及消毒：取胡萝卜的髓组织，用自来水冲洗3分钟，洗洁精漂洗并用自来水冲洗干净，然后用蒸馏水冲洗3次（以下步骤在超净工作台上完成）放入烧杯中，用酒精漂洗30秒，再移入灭过菌的烧杯中，注入0.1%HgCl溶液淹过材料，消毒10分钟（不断搅拌），最后用无菌水漂洗5次即可接种。

2、培养材料的接种：将上面消毒好的材料放入培养皿中，用镊子和剪刀将多余部分除去，在酒精灯将材料接入培养基上，盖上培养瓶盖完成接种。